ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特反应与酶对底物的催化作用相结台起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体聚苯微量滴定板的孔中进行,每加入-种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特与稳定性。实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
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操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
离心20分钟左右(2000- 3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
8.标本采集后尽早进行提取提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融.
9.不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根化物酶的(HRP)活性。
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