ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特反应与酶对底物的催化作用相结台起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体聚苯微量滴定板的孔中进行,每加入-种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特与稳定性。实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
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样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合10- 20分钟后,离心20分钟左右(2000- 3000转/分)。仔细收集上清保存过
程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管收集离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。 仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(P
H7.2-7.4)稀释细胞悬液细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。 仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8*C的温度。加入-定
量的PBS(PH7.4),用手I或匀浆器将标本匀浆充分。

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